NRPB58L Ni-TED琼脂糖凝胶FF

发布日期:2023-10-24 阅读次数:9675

品  名:Ni-TED琼脂糖凝胶FF

英文名:Ni-TED NUPharose FF

目录号:NRPB58L、NRPB58S(预装柱)

规  格:10 mL, 20 mL,50 mL, 100 mL,500 mL, 1 L,10 L, 1 mL预装柱,5 mL预装柱,特殊规格订制

运  输:2 ~ 30℃,常压、避光

贮  存:20%乙醇,2 ~ 30℃

保质期:5年


相关介绍: 

Ni-TED琼脂糖凝胶FF以琼脂糖微球为基质,通过活化偶联三羧甲基乙二胺(TED),再螯合Ni2+。与亚氨基二乙酸(IDA)相比,Ni-TED琼脂糖凝胶FF具有很好的螯合剂、还原剂、碱性的耐受性,如样品中含有10-100mM EDTA或10-100mM β-巯基乙醇或5-20mM DTT,均可正常纯化;无需脱镍,也可以用1M NaOH再生清洗。


Ni-TED琼脂糖凝胶FF主要用于纯化带组氨酸标签(His-Tag)的重组蛋白。纯化原理是利用重组蛋白组氨酸标签的咪唑环可与过渡金属Ni2+形成稳定的配位键,因此能特异、牢固、可逆地吸附于固定这些金属离子的基质,结合了His-Tag重组蛋白的Ni-TED琼脂糖凝胶FF一般通过增加咪唑浓度进行竞争洗脱。


技术指标:

基质

6%交联琼脂糖

配基

TED

配基密度

30 μmol/ml

平均粒径

~90 μm

最大流速

1500 cm/h

推荐流速

60-300 cm/h

pH稳定性

pH 3-12

0.5 MPa

载量

20 mg His-tag重组蛋白/ml 


使用方法:

1、色谱柱装填

以下阐述与层析系统连接时,填料的色谱柱装填方法。

1.1所有需要用到的材料的温度要与色谱操作的温度一样,液体最好做脱气处理。

1.2填料用量计算:通过沉降定量填料体积,需要的沉降填料体积=柱体积×压缩比(也称压缩因子)。沉降体积是指填料在20%乙醇保存液中自然沉降完全读取的稳定体积。IDA NUPharose FF的压缩比为1.15。为使达到装柱比,可通过柱头下压的方法,也可以通过高流速压柱。

1.3填料清洗:将填料悬液充分摇匀后量取相应体积,抽滤除去液体,并用约3倍填料体积的纯化水洗涤,重复3次,以除去保存液。

1.4装柱填料悬液准备:将填料转移到适当的容器中,加入适量的装柱液,制成50~75 v%的装柱填料悬液,使用前搅匀。

1.5装填前准备:在清洗干净的层析柱下端加入装柱液,以除去下垫片及层析柱下端的空气,在柱内保留少量的蒸馏水,拧紧下堵头,调整柱子使其垂直于地面。

1.6装填:将搅匀后的填料悬液一次性缓慢倒入层析柱内(必要时使用装柱器),为避免引入气泡,应使之沿层析柱内壁自然流下。将所有填料加入后,用装柱液将装柱器加满,拧紧装柱器上盖,将柱子与层析系统连接。

1.7压柱:使柱内填料自然沉降(或50~150 cm/h的低流速下沉降),待填料沉降完全后(填料与液体的界面清晰),去除装柱器,装上上柱头,并将柱头下降至界面处;通过高流速(推荐流速见下表,注意柱压不超过0.3 MPa),继续压柱至界面清晰稳定,标记界面稳定时的柱高。停泵,打开柱头上的阀门/堵头,关闭柱底的阀门/堵头,下压柱头至标记位置下方与压缩比对应的位置,旋紧柱头,装柱完成。装柱完成后,需用高流速平衡柱内的填料。

2、上样

(1)缓冲液选择:一般选用pH6-8的结合缓冲液,常用缓冲液有10-00mM 磷酸钠缓冲液、20-200mM Tris-HCl缓冲液等。在缓冲液中一般要加入0.15-0.5M的NaCl,以消除离子交换作用。在初次使用Ni-TED琼脂糖凝胶FF,推荐使用50mM PBS(50 mM NaH2PO4,0.5M NaCl,NaOH调节pH 7.4)作为结合缓冲液。

(2)样品处理:样品的缓冲液应与所选结合缓冲液一致。为保证缓冲液一致,可以在结合缓冲液中破碎细菌、或调解pH与结合缓冲液一致、或交换至结合缓冲液(常用方法有透析、超滤、脱盐柱换液等)、或用结合缓冲液稀释2-10倍等。样品上柱前应0.45μm过滤。

3、洗脱

(1)Ni-TED琼脂糖凝胶FF最常用的洗脱方法为增加咪唑浓度进行洗脱。

(2)咪唑为碱性,相应缓冲液配制后需要用HCl进行调节pH。

(3)在初次使用Ni-TED琼脂糖凝胶FF,不知道洗脱的咪唑浓度,建议在结合缓冲液中分别加入10mM、20mM、50mM、100mM、200mM、500mM咪唑,浓度从低到高,分别洗脱和收集,通过SDS-PAGE电泳等方法鉴定洗脱组份。

(4)有条件的也可以进行线性咪唑梯度洗脱,确定较佳洗脱条件。

4、在位清洗

使用完的层析柱出现堵塞、压力增大、流速减慢、载量下降等情况时,就需要进行在位清洗。Ni-TED琼脂糖凝胶FF的优势为无需脱镍即可用1M NaOH再生清洗,所以清洗最常用的方法:使用完的层析柱用蒸馏水清洗3-5个柱体积,然后用1M NaOH清洗3-5个柱体积(保持时间0.5-1h),然后用蒸馏水清洗至中性即可。同其它层析介质一样,为了达到更好的清洗目的,可以采用反向清洗;如需去除热源,可在1M NaOH中保持更长时间(1-2h)。

除了NaOH清洗外,强电荷蛋白可以用1-2M NaCl进行清洗;脂类、脂蛋白、强疏水蛋白可以用30%异丙醇(或70%乙醇)进行清洗。

导购指南

中文名

英文简称

货号

规格

产品描述

重力预装柱

Ni-TED琼脂糖凝胶FF重力预装柱

Ni-TED  NUPharose FF pre-packed column

NRPB58S-Z11

1*1mL

1支*1ml

NRPB58S-Z41

4*1mL

4支*1ml

NRPB58S-Z15

1*5mL

1*5mL

NRPB58S-Z25

2*5mL

2支*5mL

AKTA中压预装柱

Ni-TED琼脂糖凝胶FF中压预装柱

Ni-TED  NUPharose FF pre-packed column

NRPB58S-Y11

1*1mL

1支*1ml

NRPB58S-Y41

4*1mL

4支*1ml

NRPB58S-Y15

1*5mL

1*5mL

NRPB58S-Y25

2*5mL

2支*5mL

填料

Ni-TED琼脂糖凝胶FF

Ni-TED  NUPharose FF

NRPB58L-10

10mL

1瓶*10ml

NRPB58L-20

20mL

1瓶*20ml

NRPB58L-100

100mL

1瓶*100ml

NRPB58L-500

500ml

1瓶*500ml

注:纽龙生物填料体积为实际琼脂糖凝胶体积