NRPB61L Strep-Tactin2琼脂糖凝胶FF

相关介绍： 

Strep-Tactin 2 NUPharose FF是链霉亲和素的突变体（Strep-Tactin 2配基）和纽龙生物NUPharose琼脂糖凝胶偶联形成的和层析分离介质，用于分离、纯化Strep II或Twin Strep标签蛋白。Strep II标签为8个氨基酸的小标签（WSHPQFEK），一般不影响融合后蛋白质的结构和功能，常用于融合表达蛋白质的检测和纯化。Twin Strep标签为两个Strep II串联的标签，相比Strep II标签，Twin Strep标签与Strep-Tactin 2配基的亲和力更高。

本产品的Strep-Tactin 2配基与Strep-Tactin配基相比，对Strep II标签的亲和力进一步提高，与生物素的亲和力大幅削弱。因而本产品能够更牢固的结合Strep II融合蛋白，在融合蛋白表达丰度较低时，相对捕获量更高，载量和得率更高。在洗脱方面，可以使用生物素进行洗脱，比采用昂贵的脱硫生物素洗脱更经济，且使用后可采用10~50 mM NaOH进行再生。本产品对Strep II标签具有高度特异性，一般只需一步纯化就能获得高纯度的蛋白质样品。

技术指标：

使用方法：

1 推荐缓冲液

纯化Strep II标签蛋白

结合缓冲液：100 mM Tris-HCl，150 mM NaCl，1 mM EDTA，pH 8.0；

 　　　　　　或20 mM NaH₂PO₄，280 mM NaCl，6 mM KCl，pH 7.4

洗脱缓冲液：结合缓冲液 + 10~50 mM D-生物素；

再生缓冲液：10~50 mM NaOH

2 样品准备

上柱的样品应尽量保持与结合缓冲液一致。通常可用透析、超滤、稀释等方法处理样品。并且上柱前应过0.45 μm滤膜或高速离心去除不溶物。

3 样品纯化

3.1 平衡：取适量的Strep-Tactin2琼脂糖凝胶FF装入合适的层析柱中，用蒸馏水清洗5个柱体积去除保存液，再用结合缓冲液平衡5个柱体积，建议流速为100 cm/h。

3.2 上样：将准备好的样品上柱，建议流速为20 ~ 100 cm/h，可根据实际结合情况选择流速，能获得较好的效果。

3.3 再平衡：上样后用结合缓冲液平衡10个柱体积以上，或平衡至基线，洗去杂质，推荐流速为100 cm/h。

3.4 洗脱：用洗脱缓冲液洗10 ~ 20个柱体积，建议流速为100 cm/h，收集的洗脱液应立即调节pH至稳定范围，并根据需要置换缓冲液。

3.5 NaOH再生：洗脱目的蛋白后的柱子用蒸馏水清洗3 ~ 5个柱体积，并用 NaOH再生3 ~ 5个柱体积，再用蒸馏水清洗至中性，用20%乙醇保存柱子，或进行下一次纯化。

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