NRPB03S 重组人源血管内皮生长因子亲和琼脂糖凝胶预装柱

发布日期:2018-10-27 阅读次数:122

品  名: 重组人源血管内皮生长因子亲和琼脂糖凝胶

英文名: Recombinant Human VEGF NUPharose, rh-VEGF NUPharose

目录号: NRPB03L、NRPB03S(预装柱)

规  格: 20 ml,1 ml预装柱,5 ml预装柱,特殊规格订制

运  输: 2 ~ 25℃,常压、避光

贮  存: 20%乙醇,2 ~ 8℃

保质期: 5年


相关介绍: 

血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)又称血管通透因子(Vascular permeability factor,VPF),是胎儿和成人血管发生和血管生成过程中重要的调控因子,在增强血管的渗透性、诱导血管发生和血管生成及内皮细胞生长、促进细胞迁移、抑制细胞凋亡等方面发挥作用。


VEGF的表达水平和肿瘤内的血管生长情况呈正相关,并且和肿瘤的转移风险呈正相关,抑制VEGF信号转导可以抑制多种肿瘤的发生和发展。将rh-VEGF165偶联到琼脂凝胶填料制备成的rh-VEGF165亲和琼脂糖凝胶填料预装柱可用于筛选能够同VEGF165相互作用的化合物。


技术指标:

基质

6%高度偶联的琼脂糖凝胶

配基

rh-VEGF165

配基密度

0.25~1.0 mg/ml

填料粒径

45~165 μm

最大流速

750 cm/h

推荐流速

100 cm/h

工作(清洗)pH

3~93~10

0.3 MPa

保存条件

+2~8保存于20%乙醇溶液中


应用举例:捕捉与VEGF165相互作用的分子

结合缓冲液:20 mM磷酸缓冲液,150 mM NaCl,pH 7.4

洗脱缓冲液I:0.1M柠檬酸缓冲液,pH 6.0

洗脱缓冲液II:0.1M甘氨酸缓冲液,pH 2.7

中和缓冲液:1 M Tris-HCl,pH 9.0

以上缓冲液需要用户自己准备!

1)5 ml rh-VEGF165亲和琼脂糖凝胶预装柱用5~10个柱床体积的蒸馏水洗去保存液;

2)用结合缓冲液平衡 5~10个柱床体积;

3)3~5 ml 目的样品经0.45 μm滤膜过滤后加载上柱;

4)用结合缓冲液冲洗 5~10个柱床体积;

5)用洗脱缓冲液I和洗脱缓冲液II先后洗脱10个柱床体积;

6)自2/3柱床体积处开始收集1个柱床体积的洗脱液,并用中和缓冲液调节其pH至中性;

7)TLC双向扩散层析(图1)分析捕捉到的与VEGF165相互作用的分子。

图片37.jpg

图1、rh-VEGF165亲和琼脂糖凝胶捕捉同VEGF165相互作用的分子的TLC双向扩散层析

(茚三酮染色)


注意事项:

1)预填柱使用简易方便,在没有仪器设备的条件下也可以完成纯化任务;

2)样品洗脱后一般pH很低,应立刻用碱性中和缓冲液(如1 M Tris-HCl,pH 9.0)将收集到的洗脱液中和到中性,或在收集容器中事先装5%~10%、pH 9.0的缓冲液(如1 M Tris-HCl或1 M 磷酸缓冲液),以利于维持目标分子的生物活性,避免目标分子失活;

3)使用时保证柱子和缓冲液的温度一致,避免柱床内产生气泡,如果已经产生气泡,可以自行重装柱子;

4)通常使用后应用4个柱床体积的0.1 M甘氨酸- HCl(pH 2.7)做再生处理,然而长期采用极端的洗脱条件将缩短亲和介质的使用寿命,每使用5次再生1次即可。

5)本产品使用10次后最好先用20%乙醇洗5个柱床体积,然后再用70%乙醇洗脱5~10个柱床体积,可洗脱脂类和疏水性较强的蛋白质,恢复柱子的载量和流速。