NRPB04S 重组人碱性成纤维细胞生长因子亲和琼脂糖凝胶预装柱

发布日期:2018-10-27 阅读次数:130

品  名:重组人碱性成纤维细胞生长因子亲和琼脂糖凝胶

英文名:Recombinant Human bFGF NUPharose,rh-bFGF NUPharose

目录号:NRPB04L、NRPB04S(预装柱)

规  格:20 ml,1 ml预装柱,5 ml预装柱,特殊规格订制

运  输:2 ~ 25℃,常压、避光

贮  存:20%乙醇,2 ~ 8℃

保质期:5年


相关介绍: 

碱性成纤维细胞生长因子(Fibroblast Growth Factor-basic,bFGF)又称FGF-2,能够与肝素相结合,属于FGF超家族的一员,在胚胎形成、组织再生、伤口愈合、中枢神经系统发育、血管生成和肿瘤发展等过程中发挥重要的作用。


很多中药在临床上被证明具有治疗癌症的功效,但其有效成分不明。将rh-bFGF偶联到琼脂凝胶填料制备成的rh-bFGF亲和琼脂糖凝胶填料预装柱可用于从中药中筛选能够同bFGF相互作用的药物分子,为中药抗癌有效成分的鉴定提供有效、快速的方法。


技术指标:

基质

6%高度偶联的琼脂糖凝胶

配基

rh-bFGF

配基密度

0.25~1.0 mg/ml

填料粒径

45~165 μm

最大流速

750 cm/h

推荐流速

100 cm/h

工作(清洗)pH

3~93~10

0.3 MPa

保存条件

+2~8保存于20%乙醇溶液中


应用举例:捕捉与bFGF相互作用的分子

1)1 ml rh-bFGF亲和琼脂糖凝胶预装柱用20 mM PBS(pH7.4)平衡5~10个柱床体积;

2)10 ml 三叶青饮片泡制液经0.45 μm滤膜过滤后加载上柱;

3)用20 mM PBS(pH7.4)平衡 5个柱床体积;

4)用100 mM甘氨酸-HCl(pH2.7)洗脱4个柱床体积;

5)自2/3柱床体积处开始收集1个柱床体积的洗脱液,并用中和缓冲液调节其pH至中性;

6)用HSA亲和柱从三叶青饮片泡制液中分离与HSA结合的活性成分作为对照;

7)HPLC检测分析(图1)捕捉到的与bFGF相互作用的分子。

图片38.jpg

图1、rh-bFGF亲和琼脂糖凝胶捕捉同bFGF相互作用分子的HPLC检测


注意事项:

1)预填柱使用简易方便,在没有仪器设备的条件下也可以完成纯化任务;

2)样品洗脱后一般pH很低,应立刻用碱性中和缓冲液(如1 M Tris-HCl,pH 9.0)将收集到的洗脱液中和到中性,或在收集容器中事先装5%~10%、pH 9.0的缓冲液(如1 M Tris-HCl或1 M 磷酸缓冲液),以利于维持目标分子的生物活性,避免目标分子失活;

3)使用时保证柱子和缓冲液的温度一致,避免柱床内产生气泡,如果已经产生气泡,可以自行重装柱子;

4)通常使用后应用4个柱床体积的0.1 M甘氨酸- HCl(pH 2.7)做再生处理,然而长期采用极端的洗脱条件将缩短亲和介质的使用寿命,每使用5次再生1次即可。

5)本产品使用10次后最好先用20%乙醇洗5个柱床体积,然后再用70%乙醇洗脱5~10个柱床体积,可洗脱脂类和疏水性较强的蛋白质,恢复柱子的载量和流速。