NRPB10S STI-琼脂糖凝胶FF预装柱

发布日期:2018-10-27 阅读次数:49

品  名:STI-琼脂糖凝胶FF

英文名:Soybean Trypsin Inhibitor NUPharose Fast Flow, STI NUPharose FF

目录号:NRPB010L、NRPB10S(预装柱)

规  格:20 ml,100 ml,1L,1 ml预装柱,5 ml预装柱,特殊规格订制

运  输:2 ~ 30℃,常压、避光

贮  存:20%乙醇,2 ~ 25℃

保质期:3年


相关介绍: 

STI-琼脂糖凝胶FF是一种将大豆胰蛋白酶抑制剂(STI)键合在琼脂糖凝胶微球上形成的生物亲和层析分离介质。该产品保留了琼脂糖极好的亲水性及大网架结构,与生物活性大分子有很好的相容性,具有载量高,非特异性吸附少,流速快等特点,主要用于胰蛋白酶、糜蛋白酶、凝血X因子等丝氨酸蛋白酶的提取和纯化,也可以用于肠激酶的去除。


技术指标:

基质

4%琼脂糖凝胶微球

配基

STI

配基密度

~ 6 mg/ml

填料粒径

60 ~ 180 μm

最大流速

800 cm/h

推荐流速

20 ~ 100 cm/h

pH稳定性

pH 3 ~ 9

耐反压

0.3 MPa

载量

≥30 mg/ml胰蛋白酶

保存条件

2 ~ 8℃保存于20%乙醇溶液中


使用方法:

  1. 装柱

  1.1 根据分离目标性质配制初始缓冲液(平衡液)和洗脱缓冲液。

  1.2 将凝胶抽干,并用蒸馏水洗涤2次去除保存的乙醇,用蒸馏水配成匀浆并脱气。

  1.3 将层析柱垂直固定,底端用水或缓冲液润湿并保持一段液位。

  1.4 用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内,使凝胶在柱内自由沉降。

  1.5 连结好柱子顶端活动柱头,打开蠕动泵,让缓冲液用使用时操作流速流过5柱体积,再使用1.5倍的操作流速流过5个柱体积,调节适配柱头,使其尽量贴近胶面,最后用2 ~ 3倍柱体积的缓冲液平衡柱子。


注意:

1)所有操作过程不能引入气泡,保证装胶的均匀度。

2)如无条件做1.2,填料层有气泡,可进行2次装柱,去除保存的乙醇和气泡。

3)乙醇等试剂配制的溶液需要脱气。

  2. 平衡

  将平衡缓冲液以操作流速平衡层析柱,观察检测器的变化,直到UV、pH等参数不变。推荐的平衡缓冲液为:50 mM Tris-HCl,500 mM NaCl,pH 8.0。

  3. 上样

  切换转换阀进行上样,上样量根据样品的性质和层析介质的量进行选择,也可进行线性实验找到最佳上样量;样品的预处理:置换缓冲液,澄清过滤(0.45、0.22 μm)等。

  4. 冲洗

  用2 ~ 3个柱体积的平衡缓冲液冲洗上样后的层析柱,观察检测器的变化,直到UV、pH等参数不变。

  5. 洗脱

  一般用酸性缓冲液进行洗脱。推荐的洗脱缓冲液为:100 mM Glycine-HCl,500 mM NaCl,pH 3.0。洗脱后的样品应尽快调节至中性,比如加入1/10体积的2 M Tris-HCl (pH 8.0)。

  6. 清洗

  可以用平衡缓冲液和洗脱缓冲液反复清洗,本填料的活性基团为蛋白质,不能耐受强酸、强碱、强有机溶剂的清洗。