NRPB01L 重组蛋白A琼脂糖凝胶FF

发布日期:2018-10-27 阅读次数:181

品  名: 重组蛋白A 琼脂糖凝胶FF

英文名: Recombinant Protein A NUPharose Fast Flow, rProtein A NUPharose FF

目录号: NRPB01L、NRPB01S(预装柱)

规  格: 20 ml,100 ml,1 L,1 ml预装柱,5 ml预装柱,特殊规格订制

运  输: 2 ~ 25℃,常压、避光

贮  存: 20%乙醇,2 ~ 8℃

保质期: 3 年


相关介绍: 

蛋白A是一种金黄色葡萄球菌细胞壁蛋白质,包含有5个区域,可以同IgG的Fc片段结合。作为一个亲和配基,蛋白A能够比较紧密地偶联到NUPharose上,使得这些区域可以同游离的IgG自由结合。一分子的蛋白A可以结合两分子的IgG。


技术指标:

基质

4%高度交联琼脂糖凝胶

配基

重组蛋白A

配基密度

 6 mg/ml

填料粒径

60 ~ 180 μm

最大流速

800 cm/h

推荐流速

20 ~ 100 cm/h

pH稳定性

pH 3 ~ 9

耐反压

0.3 MPa

载量

≥40 mg/ml IgG


抗体与蛋白A、蛋白G的结合力:

种类

Species

亚型

Antibody Class

蛋白A

Protein A

蛋白G

Protein G

Human

IgG1

IgG2

IgG3

IgG4

IgM

IgD

IgA

Fab

+++

+++

+

+++

+

-

+

+

+++

+++

+++

+++

-

-

-

+

小鼠

Mouse

IgG1

IgG2a

IgG2b

IgG3

IgM

+

+++

+++

+++

-

++

+++

+++

+++

-

大鼠

Rat

IgG1

IgG2a

IgG2b

IgG2c

+

-

-

+++

++

+++

+

+++

Cow

IgG1

IgG2

+

+++

+++

+++

山羊

Goat

IgG1

IgG2

+

+++

+++

+++

Horse

IgG(ab)

IgG(c)

IgG(T)

+

+

-

-

-

+++

Rabbit

IgG

+++

+++

Pig

IgG

+++

+

Dog

IgG

+++

+

Chicken

IgY

-

-

注:-表示不结合;+表示微弱结合;++表示中等结合;+++表示很强结合。


应用举例:

结合缓冲液:20 mM磷酸缓冲液,150 mM NaCl,pH 7.4

洗脱缓冲液:0.1 M柠檬酸缓冲液,pH 4.0

中和缓冲液:1 M Tris ~ HCl,pH 9.0

1)1 ml重组蛋白A琼脂糖凝胶预填柱用5 ~ 10个柱床体积的蒸馏水洗去保存液;

2)用结合缓冲液结合缓冲液平衡 5 ~ 10个柱床体积;

3)将5 ml兔多抗血清用结合缓冲液稀释到50 ml,0.45 μm滤膜过滤上样;

4)用结合缓冲液再洗 5 ~ 10个柱床体积;

5)用洗脱缓冲液洗脱抗体,收集洗脱峰,并用中和缓冲液调节其pH至中性;

6)每次使用后用3 ~ 5个柱床体积的0.1 M 柠檬酸缓冲液(pH 3.0)再生清洗;

7)SDS-PAGE(图1)电泳分析洗脱下来的兔多抗纯度在95%以上。


图片44.jpg

图 1


注意事项:

1)预填柱使用简易方便,在没有仪器设备的条件下也可以完成纯化任务。

2)样品洗脱后一般pH很低,应立即用碱性中和缓冲液(如1 M Tris-HCl,pH 9.0)将收集到的抗体溶液中和到中性,或在收集容器中事先装5% ~ 20%、pH 7 ~ 9的缓冲液(如1 M Tris-HCl或1 M 磷酸缓冲液),以利于维持抗体的生物活性,避免抗体失活。

3)使用时保证柱子和缓冲液的温度一致,避免柱床内产生气泡,影响纯化效果,如果已经产生气泡,可以自行重装柱子。

4)通常(每次)目标样品洗脱后应继续用0.1 M柠檬酸缓冲液(pH 2 ~ 3)洗3 ~ 5个柱体积,然后用平衡缓冲液清洗5个柱体积以上,作简易再生。

5)使用数次后应进行在位清洗,建议用0.1% Triton X-100 37℃洗1 ~ 3个柱体积(10 ~ 30 min),立即用平衡缓冲液清洗5个柱体积以上;或70%乙醇洗5个柱体积以上(可保持4 ~ 16 h),再用平衡缓冲液清洗5柱体积以上。在位清洗能去除强疏水性蛋白质和脂类,恢复柱子的载量和流速。

6)

推荐流速

预装柱体积ml

1 ml

5 ml

10 ml

流速(ml/min)

0.2

1

2