品 名:耐碱蛋白A琼脂糖凝胶FF
英文名:Recombinant alkali-tolerant Protein A NUPharose FF , rat-PA NUPharose FF
目录号:NRPB06L、NRPB06S(预装柱)
规 格:10 mL, 20 mL,50 mL, 100 mL,500 mL, 1 L,10 L, 1 mL预装柱,5 mL预装柱,特殊规格订制
运 输:2 ~ 25℃,常压、避光
贮 存:20%乙醇,2 ~ 8℃
保质期:3年
相关介绍:
rat-PA NUPharose FF是一款抗体亲和填料,其配基rat-PA为纽龙生物自研的重组耐碱蛋白A(NRPA08S,Recombinant Alkali-tolerant Protein A,rat-PA),基球NUPharose是纽龙生物经典的琼脂糖凝胶基球。重组耐碱蛋白A配基由大肠杆菌表达,不含动物来源。rat-PA NUPharose FF的基球与配基通过单点偶联而成,加之基因工程改造,其对人IgG的动态结合载量稳定在45 mg/mL,可耐受0.1~0.5 M浓度的NaOH溶液清洗和去除热源,纯化过程具备配基掉落少、宿主细胞蛋白含量低的特点
技术指标:
基质 | 4%交联琼脂糖 |
配基 | 重组耐碱蛋白A |
配基密度 | ≥6 mg/mL |
填料粒径 | ~90 μm |
最大流速 | 900 cm/h |
推荐流速 | 60~300 cm/h |
工作(清洗)pH值 | 3~10(3~12) |
耐反压 | 0.3 MPa |
动态结合载量 | ≥45 mg h-IgG/mL |
产品特点:
1)配基脱落:约1~7 ng rat-PA/mg IgG,配套的rat-PA试剂盒(NRPB53S)检测多次使用的洗脱液中残留rat-PA含量
2)耐碱性
在25℃的条件下,将rat-PA浸在不同浓度的NaOH溶液中:
0.1 M 处理72 h载量维持在90%以上;
0.5 M处理16 h在80%以上,处理36 h在50%以上;
1.0 M处理4 h在90%以上,处理8 h在50%以上。
3)耐酸性
在25℃的条件下,将rat-PA浸在不同pH的酸溶液中:
pH 3.0、pH 2.0、0.1 M HCl (pH 1.0) 处理6天载量均维持在90%以上
0.5 M HCl处理2天载量在80%以上,处理6天在50%以上
4)耐压性
仪器:AKTA explorer 100
柱子:1.0 cm×30 cm
流速:每30 s增加0.5 ml/min
5)使用寿命
200次循环纯化牛血清中IgG,每次使用0.1 M NaOH处理15 min,200次使用后未发现明显的载量损失。
应用举例:
结合缓冲液:20 mM磷酸缓冲液,150 mM NaCl,pH 7.4
洗脱缓冲液:0.1 M柠檬酸缓冲液,pH 4.0
中和缓冲液:1 M Tris-HCl,pH 9.0
1)1 ml耐碱蛋白A琼脂糖凝胶FF预填柱用5 ~ 10个柱床体积的蒸馏水洗去保存液;
2)用结合缓冲液结合缓冲液平衡 5 ~ 10个柱床体积;
3)将5 ml兔多抗血清用结合缓冲液稀释到50 ml,0.45 μm滤膜过滤上样;
4)用结合缓冲液再洗 5 ~ 10个柱床体积;
5)用洗脱缓冲液洗脱抗体,收集洗脱峰,并用中和缓冲液调节其pH至中性;
6)每次使用后用3 ~ 5个柱床体积的0.1 M NaOH溶液再生清洗;
7)SDS-PAGE(图1)电泳分析洗脱下来的兔多抗纯度在95%以上。
图 1
注意事项:
1)预填柱使用简易方便,在没有仪器设备的条件下也可以完成纯化任务。
2)样品洗脱后一般pH很低,应立即用碱性中和缓冲液(如1 M Tris-HCl,pH 9.0) 将收集到的抗体溶液中和到中性,或在收集容器中事先装5% ~ 20%、pH 7 ~ 9的缓冲液(如1 M Tris-HCl或1 M 磷酸缓冲液),以利于维持抗体的生物活性,避免抗体失活。
3)使用时保证柱子和缓冲液的温度一致,避免柱床内产生气泡,如果已经产生气泡,可以自行重装柱子。
4)使用后应进行在位清洗,一般建议用0.1 M NaOH清洗1 ~ 3个柱体积(10 ~ 30 min),立即用平衡缓冲液清洗5个柱体积以上。
5)更高要求(消毒、去内毒素、超牢固蛋白残留等)的在位清洗,可以先用含还原剂(如100 mM DTT、β-ME或1-巯基甘油)的平衡缓冲液清洗3 ~ 5个柱体积,再用0.1 ~ 0.5 M NaOH洗1 ~ 5个柱体积(10 ~ 30 min),然后用无菌无内毒素的平衡缓冲液清洗5个柱体积以上。
6)虽然本产品具有较好的碱耐受性,但长期使用较高的NaOH浓度(如0.5 mol/L)清洗仍会缩短使用寿命,建议每1 ~ 3次用0.1 M NaOH清洗1次,每5 ~ 20次用0.5 M NaOH清洗1次。
7)为了更好的保护填料,应避免强烈的pH变化,建议酸性洗脱目的抗体后,用平衡缓冲液恢复至中性,再进行NaOH清洗。
8)本产品具有极低的配基脱落率(<10 ng/mg IgG),结合耐碱特性,特别适用于单克隆抗体的生产。但实验发现长期储存后首次使用配基脱落率会比较高,建议长期储存后的首次使用,先用酸性洗脱液清洗3 ~ 5个柱体积,再用平衡缓冲液平衡和样品纯化。
推荐流速
预装柱体积 1 ml 5 ml 10 ml
流速(ml /min ) 0.2 1 2
导购指南
中文名 | 英文简称 | 货号 | 规格 | 产品描述 |
重力预装柱 | ||||
重组耐碱蛋白A琼脂糖凝胶FF重力预装柱 | rat-PA NUPharose FF pre-packed column | NRPB06S-Z11 | 1*1mL | 1支*1ml |
NRPB06S-Z41 | 4*1mL | 4支*1ml | ||
NRPB06S-Z15 | 1*5mL | 1支*5mL | ||
NRPB06S-Z25 | 2*5mL | 2支*5mL | ||
AKTA中压预装柱 | ||||
重组耐碱蛋白A琼脂糖凝胶FF中压预装柱 | rat-PA NUPharose FF pre-packed column | NRPB06S-Y11 | 1*1mL | 1支*1ml |
NRPB06S-Y41 | 4*1mL | 4支*1ml | ||
NRPB06S-Y15 | 1*5mL | 1支*5mL | ||
NRPB06S-Y25 | 2*5mL | 2支*5mL | ||
填料 | ||||
重组耐碱蛋白A琼脂糖凝胶FF | rat-PA NUPharose FF | NRPB06L-10 | 10mL | 1瓶*10ml |
NRPB06L-20 | 20mL | 1瓶*20ml | ||
NRPB06L-50 | 50mL | 1瓶*50ml | ||
NRPB06L-100 | 100mL | 1瓶*100ml | ||
NRPB06L-500 | 500ml | 1瓶*500ml | ||
NRPB06L-1000 | 1000ml | 1瓶*1000ml | ||
注:纽龙生物填料体积为实际琼脂糖凝胶体积 |