NRPB06L 重耐碱蛋白A琼脂糖凝胶FF

发布日期:2018-10-27 阅读次数:50

品  名:耐碱蛋白A琼脂糖凝胶FF

英文名:Alkali-tolerant Protein A NUPharose Fast Flow , rat-PA NUPharose FF

目录号:NRPB06L、NRPB06S(预装柱)

规  格:20 ml,100 ml,1 L,1 ml预装柱,5 ml预装柱,特殊规格订制

运  输:2 ~ 25℃,常压、避光

贮  存:20%乙醇,2 ~ 8℃

保质期:3年


相关介绍: 

耐碱蛋白A琼脂糖凝胶FF与普通的蛋白A琼脂糖凝胶相比,主要提高了凝胶的耐碱性,可以用0.1 ~ 0.5 M NaOH溶液清洗和去除热源。在骨架与重组耐碱蛋白A键合上分别设计了延伸碳臂和定向结合位点,保证了重组耐碱蛋白A与骨架的定向牢固键合,以及与抗体的高效亲和。


技术指标:

基质

4%高度交联琼脂糖凝胶

配基

重组耐碱蛋白A

配基密度

≥6 mg/ml

填料粒径

60 ~ 180 μm

最大流速

800 cm/h

推荐流速

20 ~ 100 cm/h

工作(清洗)pH

3 ~ 11(2 ~ 13)

耐反压

0.3 MPa

载量

≥40 mg/ml IgG


产品特点:

1)配基脱落:约1~7 ng rat-PA/mg IgG,配套的rat-PA试剂盒(NRPB53S)检测多次使用的洗脱液中残留rat-PA含量

2)耐碱性

在25℃的条件下,将rat-PA浸在不同浓度的NaOH溶液中:

0.1 M 处理72 h载量维持在90%以上;

0.5 M处理16 h在80%以上,处理36 h在50%以上;

1.0 M处理4 h在90%以上,处理8 h在50%以上。

图片39.jpg


3)耐酸性

在25℃的条件下,将rat-PA浸在不同pH的酸溶液中:

pH 3.0、pH 2.0、0.1 M HCl (pH 1.0) 处理6天载量均维持在90%以上

0.5 M HCl处理2天载量在80%以上,处理6天在50%以上 


图片40.jpg


4)耐压性

仪器:AKTA explorer 100

柱子:1.0 cm×30 cm

流速:每30 s增加0.5 ml/min

图片41.jpg

5)使用寿命

200次循环纯化牛血清中IgG,每次使用0.1 M NaOH处理15 min,200次使用后未发现明显的载量损失。

图片1.png


应用举例:

结合缓冲液:20 mM磷酸缓冲液,150 mM NaCl,pH 7.4

洗脱缓冲液:0.1 M柠檬酸缓冲液,pH 4.0

中和缓冲液:1 M Tris-HCl,pH 9.0

1)1 ml耐碱蛋白A琼脂糖凝胶FF预填柱用5 ~ 10个柱床体积的蒸馏水洗去保存液;

2)用结合缓冲液结合缓冲液平衡 5 ~ 10个柱床体积;

3)将5 ml兔多抗血清用结合缓冲液稀释到50 ml,0.45 μm滤膜过滤上样;

4)用结合缓冲液再洗 5 ~ 10个柱床体积;

5)用洗脱缓冲液洗脱抗体,收集洗脱峰,并用中和缓冲液调节其pH至中性;

6)每次使用后用3 ~ 5个柱床体积的0.1 M NaOH溶液再生清洗;

7)SDS-PAGE(图1)电泳分析洗脱下来的兔多抗纯度在95%以上。

图片2.png


图 1


注意事项:

1)预填柱使用简易方便,在没有仪器设备的条件下也可以完成纯化任务。

2)样品洗脱后一般pH很低,应立即用碱性中和缓冲液(如1 M Tris-HCl,pH 9.0) 将收集到的抗体溶液中和到中性,或在收集容器中事先装5% ~ 20%、pH 7 ~ 9的缓冲液(如1 M Tris-HCl或1 M 磷酸缓冲液),以利于维持抗体的生物活性,避免抗体失活。

3)使用时保证柱子和缓冲液的温度一致,避免柱床内产生气泡,如果已经产生气泡,可以自行重装柱子。

4)使用后应进行在位清洗,一般建议用0.1 M NaOH清洗1 ~ 3个柱体积(10 ~ 30 min),立即用平衡缓冲液清洗5个柱体积以上。

5)更高要求(消毒、去内毒素、超牢固蛋白残留等)的在位清洗,可以先用含还原剂(如100 mM DTT、β-ME或1-巯基甘油)的平衡缓冲液清洗3 ~ 5个柱体积,再用0.1 ~ 0.5 M NaOH洗1 ~ 5个柱体积(10 ~ 30 min),然后用无菌无内毒素的平衡缓冲液清洗5个柱体积以上。

6)虽然本产品具有较好的碱耐受性,但长期使用较高的NaOH浓度(如0.5 mol/L)清洗仍会缩短使用寿命,建议每1 ~ 3次用0.1 M NaOH清洗1次,每5 ~ 20次用0.5 M NaOH清洗1次。

7)为了更好的保护填料,应避免强烈的pH变化,建议酸性洗脱目的抗体后,用平衡缓冲液恢复至中性,再进行NaOH清洗。

8)本产品具有极低的配基脱落率(<10 ng/mg IgG),结合耐碱特性,特别适用于单克隆抗体的生产。但实验发现长期储存后首次使用配基脱落率会比较高,建议长期储存后的首次使用,先用酸性洗脱液清洗3 ~ 5个柱体积,再用平衡缓冲液平衡和样品纯化。

推荐流速

预装柱体积 1 ml 5 ml 10 ml

流速(ml /min ) 0.2 1 2

9)


推荐流速

预装柱体积

1 ml

5 ml

10 ml

流速(ml /min )

0.2

1

2