NRPB11L NHS-琼脂糖凝胶FF

发布日期:2018-10-27 阅读次数:136

品  名:NHS-琼脂糖凝胶FF

英文名:NHS Activated NUPharose Fast Flow, NHS NUPharose FF

目录号:NRPB11L

规  格:1ml,10 ml,100 ml,1L,特殊规格订制

运  输:2 ~ 25℃,常压、避光

贮  存:100%异丙醇,-20℃

保质期:1年


相关介绍:

NHS-琼脂糖凝胶FF是一种将琼脂糖凝胶微球用NHS活化形成的生物亲和层析分离介质。该产品保留了琼脂糖极好的亲水性及大网架结构,与生物活性大分子有很好的相容性,具有载量高,非特异性吸附少,流速快等特点。本活化的琼脂糖凝胶能温和的与氨基基团反应,特别适合偶联抗体、链霉亲和素、酶、核酸等功能性生物大分子。


技术指标:

外观

乳白色半透明凝胶状凝胶

基质

4%琼脂糖凝胶

配体

NHS

配体密度

≥15 μmol/mL

蛋白质载量

≥10 mg/ml IgG

耐反压

0.3 MPa

粒径范围

60 ~ 180μm

工作温度

4 ~ 40℃

基质pH稳定性

3 ~ 12(长时间);2 ~ 14(短时间)

基质化学稳定性

在以下溶液中稳定:常用的水相缓冲液;1 mol/L NaOH1 mol/L乙酸(pH 4.0);6 mol/L盐酸胍;70%乙醇。


应用实例:

实验名称:NHS-琼脂糖凝胶FF偶联抗体。

实验步骤:

1. 配制抗体:取100 mg IgG加10 ml 偶联缓冲液(0.2 M NaHCO3, 0.5 M NaCl, pH 8.3)溶解,留0.1 ml以便测定偶联效率。

2. 偶联反应:取10 ml NHS-琼脂糖凝胶FF,用50 ml 1 mM HCl分三次清洗去除保存液,清洗后立即加入抗体偶联溶液中,4℃,震荡反应6 小时或者过夜,进行偶联反应。

3. 封闭:滤出反应液,用50 ml偶联缓冲液清洗偶联后的凝胶,然后用10 ml封闭缓冲液(0.2 M NaHCO3, 0.5 M NaCl, 0.5 M 乙醇胺, pH 8.3),室温震荡4 小时(或者过夜)封闭未偶联的基团,封闭后用20 ml蒸馏水洗干净即可。

4. 检测:偶联前后的反应液用SDS-PAGE检测对比偶联效率,偶联好的填料根据配基特性测定功能和载量。


注意事项:

1. 如果配基的稳定性不了解,可以选择不同pH的缓冲液和温度,用配基相应浓度的溶液0.5 ~ 1 ml,不加填料模拟偶联条件,观察溶液是否会产生沉淀。有沉淀产生对应的偶联效果就不好,可以稍微降低pH或温度,同时可以加5%左右的甘油或PEG保护蛋白,避免产生沉淀,总之对于任何配基最好能了解其溶解性及稳定性,避免实验失败导致损失。

2. 如果偶联的配基不稳定,可在摇床上4℃振摇偶联1 ~ 12小时,以维持配基的活性。偶联配基后尽快清洗填料,避免在高pH 条件中,配基失活。

3. 更稳定的配基可以直接溶解于0.2 M碳酸氢钠,可适当提高温度,如室温,偶联时间则相应可缩短至1 ~ 2 小时。

4. 偶联蛋白的较适pH为7.5 ~ 9.0,在室温或4℃均可,提高温度能增加配基的偶联效率,根据蛋白的稳定性选择合适的pH 和温度。偶联蛋白溶液的浓度以5 ~ 15 mg/ml较佳。凝胶体积和配基溶液的体积比以1:0.5 ~ 1:2.0较佳。

5. 偶联的缓冲液可以是碳酸盐、硼酸盐和磷酸盐缓冲液,但绝对不能使用氨基的缓冲体系,如Tris-HCl缓冲液。

6. 封闭的缓冲液一般使用带氨基的小分子试剂,如乙醇胺、Tris等,pH在8 ~ 9室温封闭数小时可完全封闭。推荐的封闭缓冲液为0.5 M 乙醇胺,0.5 M NaCl,pH 8.3或0.1 M Tris-HCl,pH 8.5。

7. 在偶联中尽量使用温和的混匀方式,如震荡、翻转、旋转等。如使用磁力搅拌器或者机械搅拌,需要降低搅拌的速度,只要把填料能混匀完全悬浮起来即可,避免剧烈搅拌使凝胶微球破碎。

8. NHS-琼脂糖凝胶FF需现取现用,避免时间过长造成活性降低。