NRPB13L 蛋白A/G琼脂糖凝胶FF

发布日期:2018-10-27 阅读次数:52

品  名:蛋白A/G琼脂糖凝胶FF

英文名:Protein A/G NUPharose Fast Flow, Protein AG NUPharose FF

目录号:NRPB13L、NRPB13S(预装柱)

规  格:20 ml,100 ml,1L,1 ml预装柱,5 ml预装柱,特殊规格定制

运  输:2 ~ 25℃,常压、避光

贮  存:20%乙醇,2 ~ 8℃

保质期:3年


相关介绍: 

蛋白A蛋白G琼脂糖凝胶FF是将重组蛋白A蛋白G融合蛋白(r-PAG,NRPA14S)键合在琼脂糖凝胶微球上形成的亲和分离介质。与单独的蛋白A或蛋白G分离介质相比,具有更宽广的结合范围,可以与人的所有IgG亚型、IgA、IgE、IgM结合,但不能与小鼠的IgA、IgM和血清白蛋白结合,适合用于鼠IgG单抗的提取和检测。同时融合后的r-PAG降低对pH的依赖,允许在pH5 ~ 8进行结合。


技术指标:

基质

4%交联琼脂糖凝胶微球

配基

蛋白A蛋白G融合蛋白

配基密度

≥6 mg/ml

填料粒径

60 ~ 180 μm

最大流速

800 cm/h

推荐流速

20 ~ 100 cm/h

pH稳定性

pH 3 ~ 9pH2 ~ 10(清洗)

耐反压

0.3 MPa

载量

 20 mg/ml IgG

保存条件

2 ~ 8℃保存于20%乙醇溶液中


应用举例:

结合缓冲液:20 mM磷酸缓冲液,150 mM NaCl,pH 7.4

洗脱缓冲液:0.1 M Glycine-HCl缓冲液,pH 2.5

中和缓冲液:1 M Tris-HCl,pH 9.0

1)1 ml蛋白A蛋白G琼脂糖凝胶FF预填柱用5 ~ 10个柱床体积的蒸馏水洗去保存液;

2)用结合缓冲液结合缓冲液平衡 5 ~ 10个柱床体积;

3)将3 ml兔多抗血清用结合缓冲液稀释到15 ml,0.45 μm滤膜过滤上样;

4)用结合缓冲液再洗 5 ~ 10个柱床体积;

5)用洗脱缓冲液洗脱抗体,收集洗脱峰,并用中和缓冲液调节其pH至中性;

6)目的抗体洗脱后用结合缓冲液清洗5 ~ 10个柱体积平衡柱子;

7)分析洗脱下来的兔多抗。

种类

Species

亚型

Antibody Class

蛋白A

Protein A

蛋白G

Protein G

蛋白A蛋白G融合蛋白

Protein AG

 

 

 

Human

IgG1

IgG2

IgG3

IgG4

IgM

IgD

IgA

Fab

+++

+++

+

+++

+

-

+

+

+++

+++

+++

+++

-

-

-

+

+++

+++

+++

+++

+

-

+

+

 

小鼠

Mouse

IgG1

IgG2a

IgG2b

IgG3

IgM

+

+++

+++

+++

-

++

+++

+++

+++

-

++

+++

+++

+++

-

 

大鼠

Rat

IgG1

IgG2a

IgG2b

IgG2c

+

-

-

+++

++

+++

+

+++

++

+++

+

+++

Cow

IgG1

IgG2

+

+++

+++

+++

+++

+++

山羊

Goat

IgG1

IgG2

+

+++

+++

+++

+++

+++

Horse

IgG(ab)

IgG(c)

IgG(T)

+

+

-

-

-

+++

+

+

+++

Rabbit

IgG

+++

+++

+++

Pig

IgG

+++

+

+++

Dog

IgG

+++

+

+++

Chicken

IgY

-

-

-

注:-表示不结合;+表示微弱结合;++表示中等结合;+++表示很强结合。


注意事项:

1)预填柱使用简易方便,在没有仪器设备的条件下也可以完成纯化任务;

2)样品洗脱后一般pH很低,应立刻用碱性中和缓冲液(如1 M Tris-HCl,pH 9.0)将收集到的抗体溶液中和到中性,或在收集容器中事先装5% ~ 10%、pH 7.5的缓冲液(如1 M Tris-HCl或1 M 磷酸缓冲液),以利于维持抗体的生物活性,避免抗体失活;

3)使用时保证柱子和缓冲液的温度一致,避免柱床内产生气泡,如果已经产生气泡,可以自行重装柱子;

4)多次使用后会有沉淀蛋白,强疏水性蛋白,脂蛋白,脂质体等非特异吸附凝胶上,可以用0.1 %去垢剂短时间清洗,如0.1% Triton X-100清洗2个柱体积,立即用结合缓冲液洗5 ~ 10个柱体积。也可以用70%乙醇清洗作同样清洗。

5)

推荐流速

预装柱体积ml

1 ml

5 ml

10 ml

流速(ml /min )

0.2

1

2