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【亲和层析预装柱】NRPB42S:Strep-Tactin琼脂糖凝胶FF(Strep-Tactin NUPharose FF, SA FF) 
 日期:2017/7/12  阅读次数: 1543  来源:纽龙生物  
 
 

 

Strep-Tactin琼脂糖凝胶FF

 

品  名 Strep-Tactin琼脂糖凝胶FF
英文名 Strep-Tactin NUPharose Fast Flow, Strep-Tactin NUPharose FF
目录号 NRPB42S(预装柱)
规  格 1 ml预装柱,5 ml预装柱,10 ml预装柱,特殊规格订制
运  输 2 ~ 25℃,常压、避光
贮  存 20%乙醇,2 ~ 8℃
保质期 3年

相关介绍:
        Strep-Tactin琼脂糖凝胶FF是一种将Strep-Tactin键合在琼脂糖凝胶微球上形成的生物亲和层析分离介质,主要用于纯化Strep II标签蛋白。Strep II标签为8个氨基酸的小标签(WSHPQFEK),由于标签小,仅为1 kDa左右,一般不影响融合后蛋白质的结构和功能,常用于融合表达蛋白质的检测和纯化。
        本产品的配基Strep-Tactin是链霉亲和素(Streptavidin)的突变体,与链霉亲和素相比,Strep-Tactin对Strep II标签的亲和能力至少强10倍以上,能够在温和的条件下与Strep II融合蛋白结合和解离。由于Strep-Tacin对Strep II标签具有高度特异性,一般一步纯化就能获得高纯度的蛋白质样品。
        Strep II标签蛋白与凝胶结合后可使用脱硫生物素竞争方式进行洗脱,该洗脱方式比较温和,一般不会影响蛋白质的性质。如Strep II标签蛋白质能耐受碱性条件,也可用碱液洗脱,比如10 mM NaOH等。
        Strep-Tactin琼脂糖凝胶FF能耐受较高的碱性条件,可以用0.5 M NaOH进行再生清洗和去除热源等。
        另外,2-(4-羟基苯唑)苯甲酸(HABA)也可用于凝胶再生,过量的HABA能以竞争的方式替换脱硫生物素,但在无HABA的缓冲液中, Strep-Tactin与HABA会发生解离,从而使HABA脱落,实现再生。
技术指标:

基质 4%琼脂糖凝胶微球
配基 Strep-Tactin
配基密度 ≥5 mg/ml
填料粒径 60 ~ 180 μm
最大流速 800 cm/h
推荐流速 20 ~ 100 cm/h
pH稳定性 短时间pH 2 ~ 13;长时间pH 4 ~ 11
耐反压 0.3 MPa
载量 ≥6 mg/ml Strep II标签蛋白

使用方法:
1 推荐缓冲液
纯化Strep II标签蛋白
结合缓冲液:100 mM Tris-HCl,150 mM NaCl,1 mM EDTA,pH 8.0;
或20 mM NaH2PO4,280 mM NaCl,6 mM KCl,pH 7.4
洗脱缓冲液:结合缓冲液 + 2.5 mM 脱硫生物素;
或10 mM NaOH
再生缓冲液:0.5 M NaOH;
           或结合缓冲液+1 mM HABA
2 样品准备
上柱的样品应尽量保持与结合缓冲液一致。通常可用透析、超滤、稀释等方法处理样品。并且上柱前应过0.45 μm滤膜或高速离心去除不溶物。
3 样品纯化
3.1 平衡:取适量的Strep-Tactin琼脂糖凝胶FF装入合适的层析柱中,用蒸馏水清洗5个柱体积去除保存液,再用结合缓冲液平衡5个柱体积,建议流速为100 cm/h。
3.2 上样:将准备好的样品上柱,建议流速为20 ~ 100 cm/h,可根据实际结合情况选择流速,能获得较好的效果。
3.3 再平衡:上样后用结合缓冲液平衡10个柱体积以上,或平衡至基线,洗去杂质,推荐流速为100 cm/h。
3.4 洗脱:用洗脱缓冲液洗10 ~ 20个柱体积,建议流速为100 cm/h,收集的洗脱液应立即调节pH至稳定范围,并根据需要置换缓冲液。
3.5 NaOH再生:洗脱目的蛋白后的柱子用蒸馏水清洗3 ~ 5个柱体积,并用0.5 M NaOH再生3 ~ 5个柱体积,再用蒸馏水清洗至中性,用20%乙醇保存柱子,或进行下一次纯化。
3.6 HABA再生:用脱硫生物素洗脱目的蛋白的,还可以用HABA缓冲液再生,一般用HABA的结合缓冲液洗15个柱体积,再用结合缓冲液洗30个柱体积,然后可以用20%乙醇保存柱子,或进行下一步纯化。HABA上柱后凝胶颜色会变为红橙色,在结合缓冲液平衡后会恢复正常的白色,这种再生方式一般使用体积会大些。

 
 
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